时间：2026-01-17 分类：基础学
本研究旨在探讨对伞花烃对氢化可的松致虚寒证和地塞米松致虚热证小鼠的影响，并基于平性药双向适用条件显性特点，分析其性平偏温的中药药性及作用机制。将80只昆明小鼠随机分为空白组、虚寒模型组、虚寒人参组、虚寒对伞花烃低/高剂量组，以及空白组、虚热模型组、虚热西洋参组、虚热对伞花烃低/高剂量组。通过连续14天灌胃氢化可的松或地塞米松制备虚寒、虚热模型，除空白组和模型组灌胃生理盐水外，其余各组灌胃相应药物，持续14天。检测血清中环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)含量及肝组织中Na⁺-K⁺-ATP酶活性，同时观察对伞花烃干预后虚寒模型小鼠棕色脂肪中冷敏通道瞬时受体电位M8型(TRPM8)、热敏通道瞬时受体电位V1型(TRPV1)和解偶联蛋白1(UCP1)的表达变化。结果显示，对伞花烃能有效提升虚寒证小鼠血清中cAMP、cAMP/cGMP、TC、IgM、IgG水平及肝组织中Na⁺-K⁺-ATP酶活性，降低cGMP含量，对T3、T4、TG无显著影响;同时可降低虚热证小鼠血清中cAMP、cAMP/cGMP、T4水平及肝组织中Na⁺-K⁺-ATP酶活性，增加cGMP、IgM、IgG水平，对T3、TC、TG无明显作用。此外，对伞花烃可上调虚寒证小鼠棕色脂肪中TRPV1和UCP1的表达，下调TRPM8表达。综上，对伞花烃能显著回调虚寒证小鼠证候指标，对虚热证小鼠部分指标有改善但对脂质代谢和能量代谢指标影响不明显，表明其药性为平偏温;调控TRPV1/TRPM8/UCP1通道表达可能是其药性偏温、影响机体能量代谢的分子生物学机制。
关键词：对伞花烃;虚寒证;虚热证;药性研究;能量代谢
论文《基于虚寒和虚热证候模型探讨对伞花烃性平偏温的中药药性及机制》发表在《中国中药杂志》，版权归《中国中药杂志》所有。本文来自网络平台，仅供参考。
芳香中药指具有芳香气味的中药，可辟秽防疫，多用于疫病的治疗[1]，是临床常用且疗效独特的一类中药。对伞花烃(p-cymene)是具有特殊香味的单萜类化合物，主要存在于中草药和果蔬中，是香薷、土荆芥、百里香等[2-5]芳香中药的有效活性物质。现代研究显示，对伞花烃具备止咳、抗炎、抗糖尿病[6]及抗病毒[7]等多种药理活性，其中抗炎效果尤为突出。ZHONG W等[8]发现对伞花烃能够有效抑制肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)表达，其作用机制是通过阻断核因子κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路发挥抗炎作用，且对伞花烃胶丸(喘立安)在临床上被广泛应用于慢性支气管炎、支气管哮喘以及因感冒发热引起的咳喘反复发作等呼吸道病症的治疗。
本研究以临床应用经验总结和理论探讨为基础，对芳香中药的挥发性单体成分对伞花烃的中药药性展开深入研究，为单体成分在中医药理论指导下的配伍组方研究及临床应用提供支撑[9-11]。研究团队前期在中医药理论指导下，以临床应用为基础、药理研究为佐证，从理论上得出对伞花烃中药药性具有性平偏温的特点[9]。本实验采用温热药人参和寒凉药西洋参作为对照[12]，通过动物实验研究对伞花烃性平偏温的中药药性，并通过虚寒模型棕色脂肪中热敏通道瞬时受体电位V1型(TRPV1)/冷敏通道瞬时受体电位M8型(TRPM8)/解偶联蛋白1(UCP1)通道进一步探究对伞花烃作用偏温的分子生物学机制。
1 材料
1.1 动物
雄性昆明小鼠80只，SPF级，体质量18~22 g，购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司，许可证号SCXK(京)2019-0010。所有小鼠在北京中医药大学动物房饲养，给予普通维持饲料、自由饮水，饲养环境为室温(22±2)℃，相对湿度60%~70%，12 h/12 h日光灯模拟昼夜节律。本实验符合相关伦理学要求，经北京中医药大学伦理委员会审查批准(批件编号BUCM-2023083105-3216)。
1.2 药物
对伞花烃(成都瑞芬思德丹生物科技有限公司，批号RDD-D03711809025);人参配方颗粒(北京康仁堂药业有限公司，批号21006942);西洋参配方颗粒(北京康仁堂药业有限公司，批号22020091);氢化可的松琥珀酸钠(天津生物化学制药有限公司，批号012111043);醋酸地塞米松片(天津信谊津津药业有限公司，批号501210609)。
1.3 试剂与仪器
小鼠环腺苷酸(cAMP)酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(批号202311)、小鼠环鸟苷酸(cGMP)ELISA试剂盒(批号202311)、小鼠甲状腺素(T4)ELISA试剂盒(批号202311)、小鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒(批号202311)、Na⁺-K⁺-ATP酶活性检测试剂盒(批号ADS20240109)、BCA法蛋白含量检测试剂盒(批号ADS20240109)、甘油三酯(TG)ELISA试剂盒(批号ADS20240109)、总胆固醇(TC)ELISA试剂盒(批号ADS20240109)、小鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒(批号20240307)、小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒(批号20240307)均购于江苏科特生物科技有限公司;TRPM8抗体(批号DF7966)、TRPV1抗体(批号DF10320)、UCP1抗体(批号DF7720)购于美国Affinity Biosciences公司;甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(批号60004-1-Ig)购于美国Proteintech公司;HRP羊抗兔二抗(批号5220-0336)购于美国Seracare公司;ECL发光检测试剂盒(批号MA0186)、磷酸化蛋白酶抑制剂(批号G2007-IML)购于武汉百仟度生物科技有限公司。
酶标检测仪(型号Epoch2C，美国伯滕仪器有限公司);研磨仪(型号SWE-FP，武汉赛维尔生物科技有限公司);化学发光仪(型号JS-1070P，上海培清科技有限公司)。
2 方法
2.1 分组及给药
80只雄性昆明小鼠在SPF环境中适应性饲养7天后，按体质量随机分为10组，每组8只，分别为：空白组、虚寒模型组、虚寒人参组(1.2 g·kg⁻¹)、虚寒对伞花烃低剂量组(50 mg·kg⁻¹)、虚寒对伞花烃高剂量组(100 mg·kg⁻¹)、空白组、虚热模型组、虚热西洋参组(1.2 g·kg⁻¹)、虚热对伞花烃低剂量组(50 mg·kg⁻¹)、虚热对伞花烃高剂量组(100 mg·kg⁻¹)。
采用边造模边给药的方式，给药体积0.01 mL·g⁻¹，根据体质量变化调整灌胃量。实验第1天开始，每日上午空白组、虚寒模型组、虚热模型组灌胃等量蒸馏水，其余各组灌胃相应药物，连续14天，于第1、7、14天测量体质量。给药结束后禁食不禁水12 h，实验第15天各组小鼠摘眼球取血，颈椎脱臼处死，迅速解剖取材。
2.2 造模[13]
适应性饲养7天后，每日下午空白组灌胃等量蒸馏水，虚热组小鼠灌胃地塞米松溶液(0.35 mg·kg⁻¹)，虚寒组小鼠灌胃氢化可的松溶液(35 mg·kg⁻¹)，连续14天制备小鼠虚寒证和虚热证模型。虚寒模型表现为抱团蜷缩、毛发粗糙等;虚热模型表现为自主活动增加、易被激惹，与文献[13-18]一致，表明造模成功。
2.3 ELISA法检测血清中相关指标
各组小鼠血液静置2 h后，3500 r·min⁻¹离心分离血清，采用ELISA法检测血清中cAMP、cGMP、T3、T4、TC、TG、IgM、IgG水平，并计算cAMP/cGMP比值。
2.4 肝组织中能量代谢酶的检测
取适量肝脏组织，按组织质量体积比1∶10加入提取液，8000 r·min⁻¹离心取上清液，采用相应试剂盒检测肝组织中Na⁺-K⁺-ATP酶活性。
2.5 Western blot法检测TRPV1、TRPM8、UCP1蛋白表达
取小鼠冻存棕色脂肪组织，加入10倍量RIPA裂解液匀浆，10000×g离心取适量上清液，进行蛋白定量，金属浴100℃加热10 min。取10 μL样品进行SDS-PAGE电泳，将电泳后的凝胶转移到PVDF膜上进行电转。电转结束后，用含5%脱脂奶粉的TBST溶液封闭1.5 h，经TBST清洗后，一抗4℃孵育过夜，再用TBST洗涤条带，二抗4℃孵育4 h，最后进行ECL显色曝光，实验重复3次，结果通过ImageJ软件进行分析。
2.6 统计学分析
实验数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS Statistics 20.0软件进行数据处理与分析。先进行正态性和方差齐性检验，数据呈正态分布时，组间比较用单因素方差分析;两两比较方差齐时采用LSD分析，方差不齐时采用Dunnett's分析;任意一组数据非正态则进行非参数Kruskal-Wallis H检验，P<0.05认为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 对伞花烃对虚寒证、虚热证小鼠一般状态及体质量的影响
与空白组相比，虚寒模型组小鼠出现反应迟钝、毛发粗糙、畏缩抱团等症状;与虚寒模型组比较，虚寒人参组小鼠抱团、消瘦倦怠症状有所改善，对伞花烃也可改善虚寒模型小鼠上述症状。与空白组相比，虚热模型组小鼠出现自主活动增加、毛色发黄、大便干燥等症状，符合临床虚热证表现;与虚热模型组相比，西洋参、对伞花烃对虚热模型小鼠有一定程度的缓解作用。
实验第1天，各组小鼠体质量无显著差异。实验第7天，与空白组相比，虚寒和虚热模型组小鼠体质量显著降低(P<0.05)。实验第14天，与空白组比较，虚寒模型小鼠体质量显著减轻(P<0.01);与虚寒模型组比较，虚寒人参组、虚寒对伞花烃高剂量组小鼠体质量显著升高(P<0.01)，虚寒对伞花烃低剂量组小鼠体质量升高但差异无统计学意义(表1)。实验第14天，与空白组比较，虚热模型组小鼠体质量显著减轻(P<0.01);与虚热模型组比较，虚热西洋参组和虚热对伞花烃低剂量组小鼠体质量显著升高(P<0.05)，虚热对伞花烃高剂量组小鼠体质量升高但差异无统计学意义(表2)。
表1 对伞花烃对虚寒证小鼠体质量的影响(x±s，n=8)(单位：g)
|组别|剂量|第1天|第7天|第14天|
|空白组| - |32.93±0.20|36.26±0.35|39.41±0.67|
|虚寒模型组| - |32.71±0.32|33.41±0.44¹)|34.11±0.37²)|
|虚寒人参组|1.2 g·kg⁻¹|32.94±0.31|34.70±0.24|37.90±0.72⁴)|
|虚寒对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|32.66±0.23|34.08±0.54|37.29±0.86|
| |100 mg·kg⁻¹|32.60±0.19|33.34±0.44|37.20±0.53⁴)|
注：与空白组比较，¹)P<0.05，²)P<0.01;与模型组比较，³)P<0.05，⁴)P<0.01(表2~12同)。
表2 对伞花烃对虚热证小鼠体质量的影响(x±s，n=8)(单位：g)
|组别|剂量|第1天|第7天|第14天|
|空白组| - |32.94±0.28|36.74±0.44|39.18±0.81|
|虚热模型组| - |32.94±0.28|33.24±0.53¹)|33.99±0.55²)|
|虚热西洋参组|1.2 g·kg⁻¹|32.75±0.54|34.38±0.55|37.04±0.62³)|
|虚热对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|32.82±0.46|34.98±0.41|37.09±0.56³)|
| |100 mg·kg⁻¹|32.91±0.51|33.10±0.85|35.21±0.73|
3.2 对伞花烃对虚寒证、虚热证小鼠环核苷酸水平的影响
与空白组相比，虚寒模型组小鼠cAMP、cAMP/cGMP水平均显著降低(P<0.05，P<0.01)，cGMP水平显著升高(P<0.05);与虚寒模型组相比，虚寒人参组和虚寒对伞花烃低、高剂量组小鼠cAMP、cAMP/cGMP水平显著升高(P<0.05，P<0.01)，cGMP水平显著降低(P<0.05，P<0.01)(表3)。与空白组相比，虚热模型组小鼠cAMP、cAMP/cGMP水平显著升高(P<0.05，P<0.01)，cGMP水平显著降低(P<0.05);与虚热模型组相比，虚热西洋参组和虚热对伞花烃低剂量组小鼠cAMP、cAMP/cGMP水平显著降低(P<0.05，P<0.01)，cGMP水平升高(P<0.05，P<0.01)，虚热对伞花烃高剂量组cAMP水平显著降低(P<0.01)(表4)。
表3 对伞花烃对虚寒证小鼠环核苷酸水平的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|cAMP/nmol·L⁻¹|cGMP/nmol·L⁻¹|cAMP/cGMP|
|空白组| - |26.54±0.80|10.06±0.98|2.63±0.10|
|虚寒模型组| - |22.22±0.58¹)|11.30±0.32¹)|1.98±0.09²)|
|虚寒人参组|1.2 g·kg⁻¹|25.48±0.79³)|9.65±0.37³)|2.75±0.13⁴)|
|虚寒对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|25.67±1.64³)|9.63±0.63³)|2.74±0.13⁴)|
| |100 mg·kg⁻¹|26.35±1.42³)|8.07±0.53⁴)|3.16±0.17⁴)|
表4 对伞花烃对虚热证小鼠环核苷酸水平的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|cAMP/nmol·L⁻¹|cGMP/nmol·L⁻¹|cAMP/cGMP|
|空白组| - |24.69±0.52|10.16±0.11|2.22±0.09|
|虚热模型组| - |26.10±0.40¹)|9.32±0.22¹)|2.57±0.04²)|
|虚热西洋参组|1.2 g·kg⁻¹|24.26±0.37⁴)|10.63±0.31⁴)|2.33±0.04³)|
|虚热对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|23.95±0.59⁴)|10.16±0.18³)|2.33±0.09³)|
| |100 mg·kg⁻¹|23.29±0.47⁴)|9.19±0.28|2.55±0.09|
3.3 对伞花烃对虚寒证、虚热证小鼠甲状腺激素水平的影响
与空白组相比，虚寒模型组T3、T4水平差异均无统计学意义;与虚寒模型组相比，虚寒人参组以及虚寒对伞花烃低、高剂量组T3、T4水平差异均无统计学意义(表5)。与空白组相比，虚热模型组小鼠T4水平显著升高(P<0.01)，T3差异无统计学意义;与虚热模型组相比，虚热西洋参组以及虚热对伞花烃低、高剂量组小鼠T4水平显著降低(P<0.05，P<0.01)，T3水平有降低趋势，但差异无统计学意义(表6)。
表5 对伞花烃对虚寒证小鼠甲状腺激素水平的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|T3/pmol·L⁻¹|T4/pmol·L⁻¹|
|空白组| - |28.40±0.46|966.92±24.67|
|虚寒模型组| - |28.60±0.45|925.96±30.93|
|虚寒人参组|1.2 g·kg⁻¹|26.93±0.50|1191.02±28.42|
|虚寒对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|25.49±0.90|1047.33±33.27|
| |100 mg·kg⁻¹|24.66±1.04|1177.29±32.40|
表6 对伞花烃对虚热证小鼠甲状腺激素水平的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|T3/pmol·L⁻¹|T4/pmol·L⁻¹|
|空白组| - |27.77±0.55|932.58±31.37|
|虚热模型组| - |28.46±0.58|1146.07±21.06²)|
|虚热西洋参组|1.2 g·kg⁻¹|24.68±0.41|862.99±29.53⁴)|
|虚热对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|26.59±1.21|950.40±34.06⁴)|
| |100 mg·kg⁻¹|25.69±1.26|1047.49±23.43³)|
3.4 对伞花烃对虚寒证、虚热证小鼠脂质代谢的影响
与空白组相比，虚寒模型组小鼠TG、TC水平显著降低(P<0.05);与虚寒模型组相比，虚寒人参组小鼠TC水平显著升高(P<0.01);虚寒对伞花烃低、高剂量组小鼠TC水平显著升高(P<0.01)，对TG有升高趋势但差异无统计学意义(表7)。与空白组相比，虚热模型组小鼠TG、TC水平均显著升高(P<0.05);与虚热模型组相比，虚热西洋参组和虚热对伞花烃低、高剂量组小鼠TC、TG差异无统计学意义(表8)。
表7 对伞花烃对虚寒证小鼠脂质代谢的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|TC/mmol·L⁻¹|TG/mmol·L⁻¹|
|空白组| - |4.14±0.19|9.05±0.26|
|虚寒模型组| - |3.17±0.19¹)|7.66±0.45¹)|
|虚寒人参组|1.2 g·kg⁻¹|4.54±0.30⁴)|9.41±0.49⁴)|
|虚寒对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|4.62±0.39⁴)|8.04±0.51|
| |100 mg·kg⁻¹|4.84±0.30⁴)|8.84±0.49|
表8 对伞花烃对虚热证小鼠脂质代谢的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|TC/mmol·L⁻¹|TG/mmol·L⁻¹|
|空白组| - |3.55±0.21|8.07±0.15|
|虚热模型组| - |4.54±0.29¹)|9.25±0.35¹)|
|虚热西洋参组|1.2 g·kg⁻¹|4.69±0.21|8.18±0.65|
|虚热对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|5.24±0.25|9.09±0.32|
| |100 mg·kg⁻¹|5.16±0.45|8.69±0.32|
3.5 对伞花烃对虚寒证、虚热证小鼠能量代谢的影响
与空白组相比，虚寒模型组小鼠Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.05);与虚寒模型组相比，虚寒人参组和虚寒对伞花烃低、高剂量组小鼠Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著升高(P<0.05)(表9)。与空白组相比，虚热模型组小鼠Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著升高(P<0.01);与虚热模型组相比，虚热西洋参组和虚热对伞花烃低剂量组小鼠Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.05，P<0.01)，虚热对伞花烃高剂量组对其无显著影响(表10)。
表9 对伞花烃对虚寒证小鼠能量代谢的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|Na⁺-K⁺-ATP酶/U·mg⁻¹|
|空白组| - |30.13±0.51|
|虚寒模型组| - |28.50±0.42¹)|
|虚寒人参组|1.2 g·kg⁻¹|30.06±0.51³)|
|虚寒对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|30.07±0.52³)|
| |100 mg·kg⁻¹|30.13±0.35³)|
表10 对伞花烃对虚热证小鼠能量代谢的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|Na⁺-K⁺-ATP酶/U·mg⁻¹|
|空白组| - |30.48±0.34|
|虚热模型组| - |32.32±0.25²)|
|虚热西洋参组|1.2 g·kg⁻¹|30.08±0.23⁴)|
|虚热对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|30.97±0.26³)|
| |100 mg·kg⁻¹|31.25±0.26|
3.6 对伞花烃对虚寒证、虚热证小鼠免疫水平的影响
与空白组相比，虚寒模型组小鼠IgM、IgG含量显著降低(P<0.05，P<0.01);与虚寒模型组相比，虚寒人参组和虚寒对伞花烃低、高剂量组小鼠IgM、IgG含量显著升高(P<0.01)(表11)。与空白组相比，虚热模型组小鼠IgM、IgG含量显著降低(P<0.05);与虚热模型组相比，虚热西洋参组和虚热对伞花烃低剂量组小鼠IgM、IgG含量显著升高(P<0.05，P<0.01)，虚热对伞花烃高剂量组有升高趋势但差异无统计学意义(表12)。
表11 对伞花烃对虚寒证小鼠免疫水平的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|IgM/g·L⁻¹|IgG/g·L⁻¹|
|空白组| - |0.69±0.02|3.23±0.20|
|虚寒模型组| - |0.40±0.02²)|2.59±0.15¹)|
|虚寒人参组|1.2 g·kg⁻¹|0.66±0.02⁴)|3.44±0.21⁴)|
|虚寒对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|0.63±0.02⁴)|3.36±0.16⁴)|
| |100 mg·kg⁻¹|0.64±0.03⁴)|3.70±0.19⁴)|
表12 对伞花烃对虚热证小鼠免疫水平的影响(x±s，n=8)
|组别|剂量|IgM/g·L⁻¹|IgG/g·L⁻¹|
|空白组| - |0.77±0.02|3.39±0.15|
|虚热模型组| - |0.68±0.02¹)|2.85±0.12¹)|
|虚热西洋参组|1.2 g·kg⁻¹|0.77±0.04³)|3.94±0.15⁴)|
|虚热对伞花烃组|50 mg·kg⁻¹|0.78±0.03³)|3.43±0.26³)|
| |100 mg·kg⁻¹|0.72±0.02|3.12±0.21|
3.7 对伞花烃对虚寒证小鼠棕色脂肪组织中TRPV1、TRPM8、UCP1蛋白表达的影响
基于上述实验结果，对伞花烃对虚寒证小鼠的生物学效应改变更为显著，故进一步探究其对虚寒证小鼠棕色脂肪中冷热通道TRP蛋白和UCP1蛋白的影响。与空白组比较，虚寒证模型小鼠棕色脂肪中UCP1、TRPV1表达显著降低(P<0.05，P<0.01)，TRPM8表达显著升高(P<0.01);与虚寒模型组相比，虚寒对伞花烃高剂量组小鼠棕色脂肪中TRPM8蛋白表达降低，TRPV1、UCP1蛋白表达显著升高(P<0.05)，虚寒对伞花烃低剂量组与高剂量组有相同趋势(图1)。提示对伞花烃能够激活小鼠棕色脂肪中的热敏感通道，增加产热量并同时抑制冷敏感通道的激活，从而调控小鼠体内能量代谢等水平变化。
图1 对伞花烃对虚寒证小鼠棕色脂肪中TRPM8、TRPV1、UCP1蛋白表达的影响(x±s，n=3)
注：与空白组比较，P<0.05，P<0.01;与模型组比较，*P<0.05
4 讨论
寒热药性是中药药性研究的重要内容，也是主要的着眼点和切入点[12]。笔者在中医药理论指导下，以临床应用为基础、药理研究为佐证[19]，已通过理论探讨得出对伞花烃的中药药性：味辛、性平，归肺、肾经;有芳香辟秽、止咳平喘之效，可用于治疗疫毒壅肺[20]或痰饮阻肺之咳嗽痰多、气促、喘憋等，肾虚之气逆喘息，病毒性肺炎[21]和慢性支气管炎[22]。
本研究基于平性药“双向适用，条件显性”的特点[23]，采用虚寒证、虚热证小鼠模型进行寒热药性实验研究，探讨其性平药性。寒热药性的研究与中医寒热证候本质研究密不可分，因此在动物研究中构建能够准确反映临床寒热证候特征的动物模型尤为重要。研究表明[16-20]，利用糖皮质激素诱导的虚寒与虚热病理状态模型，因其对神经、内分泌、免疫等多个体内系统均有显著影响，成为当前最为常用的病理造模方式之一，所造成的模型直观、稳定且简便易行。遵循“阳虚则寒、阴虚则热”的中医理论，本研究采用氢化可的松诱导虚寒模型，模型小鼠表现出明显的抱团蜷缩、反应迟钝、毛发粗糙等虚寒表观症状，符合临床虚寒症状;地塞米松造成的虚热模型动物表现出自主活动增加、易被激惹、毛色发黄、大便干燥等虚热表观症状，与临床症状一致。值得注意的是，鉴于氢化可的松与地塞米松均为激素类药物，且氢化可的松为短效制剂，长期使用易触发机体内垂体-肾上腺皮质轴的负反馈调节[24]。结合文献研究和本课题组的前期研究[15,25-27]，本实验采取了边造模边给药的策略，以期达到最佳的实验效果。
机体状态是中药药性生物学效应表达的载体，不同药性作用于机体表现出的生物学效应亦不相同[28]。现代研究表明，机体的寒热状态与物质、能量、内分泌[29]、免疫[18]、环核苷酸水平[30]紧密相关。cAMP与cGMP广泛分布于体内组织，作为激素、神经递质及药物效应的关键中介，是机体信号传递的核心。研究证实，cAMP、cGMP两者对维持机体阴阳平衡至关重要：当机体处于虚热状态时，交感神经的活动会增强，cAMP升高，cGMP降低，进而使得cAMP/cGMP比值升高;相反，在机体处于虚寒状态时，则趋势相反[31]。虚热状态时，垂体-甲状腺轴活跃，T3、T4[32]提高组织耗氧量，增加产热，TC、TG[33]含量上升。体内糖类、脂类及蛋白质等物质的分解释放出能量[34]，促进腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)的生成，而ATP的变化可以直接反映机体能量代谢的高低，影响Na⁺-K⁺-ATP酶的活性[35]。此外，免疫系统是机体重要防御系统，IgG和IgM含量反映机体的抗病能力[36]。长期使用激素会抑制免疫反应，阻碍IgG、IgM的合成，降低机体的抗病能力，造成中医的“虚证”[16]。
本研究结果显示，在虚寒模型中，两个给药组小鼠体质量均增加，血清中cAMP、cAMP/cGMP、TC、IgG、IgM水平和肝组织中Na⁺-K⁺-ATP酶活性均升高，血清中cGMP水平降低，且高剂量组影响更具显著性，表现出与人参相同的趋势，缓解了虚寒小鼠的症状;在虚热模型中，给予低剂量对伞花烃后，模型小鼠的cAMP、cAMP/cGMP、T4、Na⁺-K⁺-ATP酶活性均显著下降，cGMP、IgG、IgM水平上升，缓解了小鼠的虚热症状;对伞花烃高剂量组有缓解虚热模型的趋势，但综合效果不明显。
基于对传统中药的现代认识和研究，众多学者从神经系统、物质代谢、能量代谢、内分泌系统等角度入手，以中药的生物学效应、冷热离子通道和棕色脂肪产热能力为观察对象，探讨中药寒热药性的客观属性和内涵[37]。研究表明，中药作用于人体后，其寒热药性的表现会对冷热离子感受器产生影响，瞬时感受器电位离子通道蛋白(TRPs)中热敏通道受体TRPV1和冷敏通道受体TRPM8与机体寒热感受和温度调节紧密相关[38]，TRPV1和TRPM8被激活后通道打开，将以钙离子等阳离子的形式将温度感觉信号传入细胞内，这是温度信息传递和寒热感受的分子基础[39-40]。棕色脂肪组织对机体热能的产生具有重要意义，棕色脂肪组织中UCP1可通过解偶联反应释放能量而产生热量[41]，这是机体重要产热方式，隋峰等[42]通过热偶检测技术发现温性中药可通过激活TRPV1通道增加机体产生热量。本实验结果表明，对伞花烃通过激活虚寒模型中棕色脂肪组织的TRPV1通道并同时抑制TRPM8通道蛋白的表达，从而上调小鼠棕色脂肪组织中UCP1的表达，促进机体产热量的增加，缓解模型小鼠虚寒证的状态，使机体的能量代谢等水平恢复正常。
综上所述，对伞花烃对虚寒证小鼠模型大部分指标有明显回调作用，对虚热模型部分指标可回调但对脂质代谢和能量代谢指标的影响不明显，显示其对虚寒模型调节更为显著，可认为对伞花烃的中药药性为性平偏温。其偏温作用的分子生物学机制可能是通过影响机体冷热离子通道蛋白表达，从而提高机体棕色脂肪组织中UCP1的表达，增加产热量，调节寒热平衡，进而调控机体能量代谢等表观生物学效应。
本研究在原有理论探讨工作的基础上，通过动物实验研究了对伞花烃的中药寒热属性，并进一步在分子水平上探究了对伞花烃温性成分的作用机制，为传统中医药理论的科学性提供了实验依据。但机体内的寒热表征涉及多层面、多环节的共同作用，本实验仅进行了TRP冷热离子通道结合表观生物学效应指标的研究，这可能是中药寒热药性众多作用途径之一，更深入的寒热药性机制有待进一步研究与发现。
参考文献
[1] 王加锋，滕佳林. 芳香类中药的药性及临床应用[J]. 中药与临床，2016，7(6)：41.
[2] 邵亚洲. 密花香薷挥发油对当归害虫防治的活性物质研究[D]. 兰州：西北师范大学，2021.
[3] 魏嘉锡，郭晓晗，高展，等. 荆花胃康胶丸含量测定及特征图谱鉴别方法研究[J]. 药物分析杂志，2023，43(8)：1321.
[4] 马风华，胡海英，李爱华，等. 宁夏不同类型草地百里香挥发性有机物的组成及其差异[J]. 草业科学，2023，40(11)：2800.
[5] 孙小鑫. 天然茉莉、菊花精油香气协同作用机制研究[D]. 上海：上海应用技术大学，2019.
[6] ARABLO EISANI M，YAGHMAEI P，HAJEBRAHIMI Z，et al. Therapeutic effect of p-cymene on lipid profile，liver enzyme，and Akt/mTOR pathway in streptozotocin-induced diabetes mellitus in wistar rats[J]. J Obes，2022，2022：1015669.
[7] BALAHBIBA，ELOMARIN，HACHLAFINE，et al. Health beneficial and pharmacological properties of p-cymene[J]. Food Chem Toxicol，2021，153：112259.
[8] ZHONG W，CHI G，JIANG L，et al. p-Cymene modulates in vitro and in vivo cytokine production by inhibiting MAPK and NF-κB activation[J]. Inflammation，2013，36：529.
[9] 赵尹铭，王林元，张建军，等. 基于抗病毒性肺炎挥发性成分作用对芳香中药单体成分中药药性及配伍应用的研究[J]. 中国中药杂志，2025，50(8)：2013.
[10] 金锐，赵茜，张冰. “三要素”理念下药性实质的数学探索[J]. 中国中药杂志，2014，39(20)：4060.
[11] 张建军，王淳，费文婷，等. 外来药物“中药化”的研究思路与策略[J]. 中华中医药杂志，2017，32(4)：1425.
[12] 肖小河，郭玉明，王伽伯，等. 基于传统功效的中药寒热药性研究策论[J]. 世界科学技术(中医药现代化)，2013，15(1)：9.
[13] 王祥山，朱映黎，吕美豫，等. 鹿鞭对肾阴虚及肾阳虚小鼠抗疲劳作用及PI3K-Akt通路机制研究[J]. 中国中药杂志，2023，48(11)：3032.
[14] 王林元，张建军，王淳，等. 阿萨伊对虚热及虚寒证候模型的生物学表达特征影响[J]. 中国中药杂志，2016，41(20)：3833.
[15] 林清，陶然，梁唯灿，等. 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路的鹿鞭四气表征研究[J]. 中华中医药杂志，2024，39(8)：4017.
[16] 王子晨，张建军，朱映黎，等. 阿萨伊对虚热和虚寒证大鼠的脂肪代谢、免疫物质和内分泌激素的影响[J]. 中国中药杂志，2017，42(13)：2552.
[17] 周雪，乐娜，张烁，等. 阿萨伊油、醇提及水提物对虚热及虚寒小鼠温度趋向性及代谢水平的影响[J]. 中国中药杂志，2020，45(5)：991.
[18] 乐娜，周雪，费文婷，等. 玛咖对虚寒及虚热证大鼠环核苷酸水平及神经-内分泌-免疫网络的影响[J]. 中国中药杂志，2020，45(5)：1004.
[19] 张建军，王淳，费文婷，等. 外来药物“中药化”的研究思路与策略[J]. 中华中医药杂志，2017，32(4)：1425.
[20] PANAGIOTOPOULOS A，TSELIOUM K，KARAKASILIOTISI，et al. p-Cymene impairs SARS-CoV-2 and influenza A(H1N1)viral replication：in silico predicted interaction with SARS-CoV-2 nucleocapsid protein and H1N1 nucleoprotein[J]. Pharmacol Res Perspect，2021，9(4)：e798.
[21] XIE G，CHEN N，SOROMOULW，et al. p-Cymene protects mice against lipopolysaccharide-induced acute lung injury by inhibiting inflammatory cell activation[J]. Molecules，2012，17(7)：8159.
[22] 田玉红，董菲，陈房姣，等. 柳桉叶挥发油的化学成分研究[J]. 广西科技大学学报，2019，30(1)：1.
[23] 汤如莹，张建军，赵子楠，等. 灵芝孢子粉性平偏温的中药药性研究[J]. 中华中医药杂志，2020，35(3)：1181.
[24] 倪莉，张冰. 糖皮质激素诱导阴虚阳虚状态动物模型的再认识[J]. 北京中医药大学学报，2009，32(5)：327.
[25] 邸松蕊，朱映黎，李一芃，等. 基于药证相应探讨附子对虚寒、虚热证候一氧化氮/线粒体能量代谢信号通路的影响[J]. 中华中医药杂志，2024，39(8)：3996.
[26] 郑婷，梁唯灿，吕瑞琳，等. 新外来中药紫锥菊对虚热证虚寒证小鼠甲状腺激素和物质能量代谢的影响[J]. 世界中医药，2024，19(11)：1569.
[27] 李自辉，陈平平，王宇，等. 基于高通量测序技术的黄芩提取物对热证模型大鼠肠道菌群多样性的影响[J]. 中草药，2021，52(2)：422.
[28] 王智威，邸松蕊，黄鹏力，等. 基于AMPK信号通路的附子在不同机体状态下对神经-内分泌-免疫网络的生物学效应表达机制研究[J]. 环球中医药，2023，16(8)：1508.
[29] 费文婷，王子晨，王玉杰，等. 玛咖对虚寒及虚热证大鼠环核苷酸及下丘脑-垂体-甲状腺轴水平的影响[J]. 中华中医药杂志，2019，34(1)：364.
[30] GUAN W，LIU Y，LI X，et al. iTRAQ-based proteomics to reveal the mechanism of hypothalamus in kidney-Yin deficiency rats induced by levothyroxine[J]. Evid Based Complement Alternat Med，2019，2019：3703596.
[31] 周晓宇，赵海军，马柯，等. 虚寒证和虚热证模型的建立及其分子机制研究进展[J]. 中华中医药学刊，2021，39(9)：133.
[32] 倪莉，张冰，刘小青，等. 地塞米松磷酸钠诱导大鼠阴虚状态的实验研究[J]. 中华中医药杂志，2012，27(2)：355.
[33] 薛春苗，张冰，金锐，等. 虚寒状态动物模型的评价研究[J]. 中华中医药杂志，2012，27(8)：2037.
[34] 陈平平，高鑫，张亚男，等. 基于物质、能量代谢的黄芩各拆分组分的药性归属研究[J]. 世界中西医结合杂志，2020，15(3)：461.
[35] SU J，LI D，CHEN Q，et al. Anti-breast cancer enhancement of a polysaccharide from spore of Ganoderma lucidum with paclitaxel：suppression on tumor metabolism with gut microbiota reshaping[J]. Front Microbiol，2018，9：3099.
[36] 檀新珠，吴晓晴，吕明其，等. 太子参茎叶多糖对小鼠免疫器官指数和血清免疫球蛋白、补体含量的影响[J]. 福建农林大学学报(自然科学版)，2017，46(5)：590.
[37] 隋峰，姜廷良. 从机体TRP寒热感受环节挖掘中药四气的现代科学内涵[J]. 中国中药杂志，2012，37(16)：2501.
[38] 隋峰，杨娜，张畅斌，等. 寒热性中药成分对TRPV1和TRPM8通道蛋白基因表达的影响[J]. 中国中药杂志，2010，35(12)：1594.
[39] ROSENZWEIG M，KANG K，GARRITY P A. Distinct TRP channels are required for warm and cool avoidance in Drosophila melanogaster[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2008，105(38)：14668.
[40] KOCHUKOV M Y，MCNEARNEY T A，FU Y，et al. Thermosensitive TRP ion channels mediate cytosolic calcium response in human synoviocytes[J]. Am J Physiol Cell Physiol，2006，291(3)：C424.
[41] TAM C S，LECOULTRE V，RAVUSSIN E. Brown adipose tissue：mechanisms and potential therapeutic targets[J]. Circulation，2012，125(22)：2782.
[42] 隋峰，戴丽，李倩，等. TRPV1通道介导的热生成是辛热(温)中药药性表征的重要模式[J]. 药学学报，2015，50(7)：836.
